Когда появляются антитела к вич

Стратегии выявления антител для ранней диагностики ВИЧ-инфекции

Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции полезна с нескольких точек зрения.

Во-первых, в таких случаях проще выявить контакты ВИЧ-инфицированного с потребителями инъекционных наркотиков и половыми партнерами (это имеет смысл, если с момента заражения прошло не более 4 месяцев).

Оглавление:

Во-вторых, поскольку высокая вирусная нагрузка на ранних стадиях инфекции повышает риск передачи ВИЧ окружающим, выявление групп населения с высокой заболеваемостью дает возможность проводить целенаправленные профилактические вмешательства. Наблюдение за популяциями с высокой заболеваемостью имеет большое значение для организации ранней диагностики ВИЧ-инфекции у новорожденных и своевременного начала антиретровирусной терапии, позволяет прогнозировать рост заболеваемости, выделять группы населения для профилактической вакцинации и подбирать пациентов с ранними стадиями ВИЧ-инфекции для участия в исследованиях ее патогенеза и новых способов лечения.

Разработаны лабораторные методики (модификации ИФА или экспресс-тестов), с помощью которых можно отличить недавнюю ВИЧ-инфекцию от длительно существующей. Они основаны на оценке титра и авидности антител к ВИЧ. Такие методики называют высоко/низкочувствительными (В/Н) или загрубленными.

В период между заражением и появлением антител к ВИЧ (то есть в период окна) ВИЧ-инфекцию можно подтвердить только путем выявления антигена p24 либо вирусной РНК или ДНК. Анализы на антитела к ВИЧ, даже самые чувствительные, не позволяют обнаружить инфекцию ранее, чем через 3 недели после заражения. С момента выявления антител их титры постепенно растут, через 3–5 месяцев достигают максимума и держатся на этом уровне на протяжении всей жизни больного. Антитела, образующиеся на ранних сроках после заражения, обычно имеют низкую авидность, которая возрастает по мере прогрессирования ВИЧ-инфекции. Таким образом, по титру и авидности антител можно отличать недавнюю ВИЧ-инфекцию от длительно существующей и оценивать время, прошедшее с момента заражения. Так, если титр или авидность антител низкие, заражение скорее всего произошло в пределах последних 4 месяцев. Если же титр или авидность высокие, то с момента заражения прошло более 4 месяцев.

Первая В/Н-методика основана на оценке титра антител к ВИЧ. В пробах, полученных на ранних стадиях инфекции, титр антител низок, но достаточен для того, чтобы пробы давали положительную реакцию при обычном (высокочувствительном) анализе. При разведении таких проб титр антител падает ниже предела чувствительности метода и результат анализа становится отрицательным (модифицированный, или низкочувствительный анализ). Если в разведенной пробе антитела не выявляются, считают, что заражение произошло недавно. Если же и после разведения пробы реакция осталась положительной, значит, исходный титр антител был высоким, т. е. после заражения прошло уже много времени. Эту В/Н-методику используют только в тех случаях, когда наличие антител к ВИЧ подтверждено иммуноблоттингом (по критериям Центров контроля и профилактики заболеваний). При отрицательном результате иммуноблоттинга определять срок заражения не имеет смысла. Описанная В/Н-методика, известная как «Алгоритм серологического выявления недавней ВИЧ-сероконверсии» (STARHS), была разработана и принята на вооружение Центрами контроля и профилактики заболеваний. Впервые с этой целью использовали тест-систему 3A11 фирмы Abbott. Это высокочувствительная тест-система первого поколения для непрямого ИФА на антитела к ВИЧ-1, сертифицированная Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США; полное наименование: Abbott HIV-1 Viral Lysate ELISA (3A11). В процессе разработки и отладки методики использовали пробы сыворотки или плазмы пациентов с сероконверсией и известными сроками заражения. Для снижения чувствительности в процедуре ИФА 3А11 изменили 4 параметра: разводили пробы враз, сократили до 30 минут сроки инкубации проб с антигеном и конъюгатом и изменили способ расчета критической ОП.

Для каждой пробы определяли нормированную ОП по формуле:

Нормированная ОП = (ОП тестируемой пробы – ОП контрольной отрицательной пробы)/ОП контрольной положительной пробы.

Путем анализа большого числа проб установили, что критическая нормированная ОП равняется 0,75. Если при низкочувствительном анализе нормированная ОП пробы, давшей положительный результат при высокочувствительном анализе, оказывается меньше 0,75, то проба получена до сероконверсии. Подсчитали, что у лиц, от которых получают такие пробы, срок после заражения в среднем составляет 129 дней (95% доверительный интервал =дней), т. е. примерно 4 месяца.

Надежность этой В/Н-методики была доказана в нескольких исследованиях, в которых участвовали ВИЧ-инфицированные на ранних сроках после заражения (что подтверждалось клиническими данными, принадлежностью к группам высокого риска и результатами иммуноблоттинга и определения антигенов ВИЧ и вирусной РНК). Надо отметить, что В/Н-методики, основанные на разведении проб, дают ложноположительные результаты при анализе проб, полученных от лиц с длительно существующей ВИЧ-инфекцией (в 0,4% случаев) и у больных со СПИДом (в 2% случаев). Поэтому для окончательного подтверждения результатов требуются подсчет лимфоцитов CD4 и клинические данные. В/Н-методики, основанные на разведении проб, дешевы, хорошо воспроизводятся и позволяют достаточно точно оценить срок заражения. Поскольку ИФА 3А11 был снят с производства, ему на смену пришли другие тест-системы с такими же характеристиками (например, тест-системы фирм Vironostika и bioMérieux). Недавно фирмой Calypte (Лэйк Освего, Орегон, США) была выпущена тест-система BED для количественного определения антител к ВИЧ методом ловушечного ИФА. Эта тест-система позволяет установить срок заражения у лиц, которые инфицированы ВИЧ, не относящимся к подтипу B. Кроме того, эта тест-система дает возможность определить подтип ВИЧ (B, E, C и A/D), поскольку в ней используются синтетические пептидные фрагменты соответствующих антигенов ВИЧ.

Вторая В/Н-методика для определения срока заражения с целью оценки заболеваемости была разработана с применением третьего поколения тест-систем на антитела к ВИЧ. Она основана на анализе авидности антител к ВИЧ и известна под названием «Определение коэффициента авидности». Авидность — это характеристика популяции антител, отражающая прочность их связывания с разными детерминантами одного антигена. Оценка авидности применяется в диагностике разных инфекционных заболеваний и позволяет выявлять острую инфекцию, дифференцировать первичную инфекцию и ее рецидив, а также устанавливать диагноз острой инфекции с использованием единственной пробы.

Источник: http://www.eurolab.ua/aids/2878/2888/35435/

Этапы диагностики ВИЧ-инфекции (СПИДа)

В прошлый раз мы познакомились с антителами и антигенами (рекомендую перечитать, иначе будет сложно разобраться). Сегодня попробуем использовать эти знания для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции (вирус иммунодефицита человека). Почему я написал именно «лабораторная диагностика»? Потому что СПИД можно диагностировать и по клиническим проявлениям, т. к. некоторые заболевания очень характерны для больных СПИДом и редко бывают у остальных. Сюда относится саркома Капоши (опухоль), ряд грибковых поражений и т.д.

Саркома Капоши часто встречается при СПИДе.

Вы знаете, в чем отличия понятий ВИЧ-инфекции и СПИДа? СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) — это более узкое понятие и означает последнюю стадию ВИЧ-инфекции, когда у человека возникают тяжелые рецидивирующие инфекционные заболевания, истощение, злокачественные опухоли, психиатрическая патология.

Все серологические (от лат. serum — сыворотка) методы обнаружения возбудителя в крови (да и не только в крови) основаны на реакции антиген-антитело. Только в одном случае используется известный антиген (то есть мы ищем антитела), а во втором — известное антитело (мы ищем антигены).

Логично предположить, что во втором случае этих антигенов в крови должно быть много. Но в биологических жидкостях организма (кровь, спинномозговая жидкость) антигенов редко бывает много, потому что с микробами активно борется иммунная система, вырабатывая антитела. Поэтому у нас остается главный вариант: искать антитела к микробу. В случае ВИЧ тоже ищут антитела к вирусу.

Отвлекусь от ВИЧ и задам каверзный вопрос: а почему тогда, например, гепатит B диагностируют не по наличию антител к возбудителю, а по наличию HBs-антигена этого вируса? А потому, что антитела к гепатиту B могут быть и у здоровых людей, когда они привиты, ведь против гепатита В есть прививка. А вот вакцина против другого опасного гепатита — гепатита С — так и не создана. Поэтому в лабораториях ищут anti-HCV (антитела к вирусу гепатита С). HCV — это аббревиатура Hepatitis C Virus. К слову, HBs-Ag называют еще австралийским антигеном, потому что впервые его обнаружили у автралийских аборигенов.

Итак, как диагностируют ВИЧ? Выявление ВИЧ-инфицированных происходит в 2 этапа: ИФА + иммуноблоттинг (отбор + подтверждение).

Первый этап — ИФА (иммуноферментный анализ): служит для отбора предположительно инфицированных лиц. Подробности метода описывать тут не стоит, скажу лишь, что антитела к ВИЧ выявляют с помощью других антител к искомым антителам (антитела против других антител). Эти «вспомогательные» антитела метят ферментом.

Метод ИФА является скрининговым (от англ. screen — тщательно отбирать; сортировать), то есть призван выявлять подозрительных лиц и отсеивать здоровых лиц. Все скрининговые тесты обязаны быть высокочувствительными, чтобы не пропустить больного. Из-за этого их специфичность не очень высокая, то есть ИФА может дать положительный ответ («вероятно болен») у НЕинфицированных людей (например, у больных аутоиммунными заболеваниями: ревматизм, системная красная волчанка и др.). Если у человека ИФА дало положительный результат, убиваться не надо, надо обследоваться дальше.

Второй этап — иммуноблоттинг (синоним: вестернблоттинг, от слова western — западный, blot — пятно). Иммуноблоттинг является более сложным методом и служит для подтверждения факта инфицирования. Вирус разрушают на компоненты (антигены), которые состоят из ионизированных аминокислотных остатков, а потому все компоненты имеют отличающийся друг от друга заряд. С помощью электрофореза (электрического тока) антигены распределяются на поверхности полоски. Если в исследуемой сыворотке есть антитела к ВИЧ, то они будут взаимодействовать со всеми группами антигенов, а это можно выявить.

Так может выглядеть результат иммуноблоттинга.

Вы видите 10 полосок, вдоль которых распределились антигены ВИЧ.

p — это протеины (белки), gp — гликопротеины (белки с углеводами)

(если забыли, перечитайте строение антигенов).

Сейчас мы подошли к главному вопросу, на который я обещал ответить в прошлый раз. Можно ли заразиться при переливании проверенной донорской крови? Ответ: ДА. Взятую у донора кровь тщательно проверяют на наличие ряда инфекций: ВИЧ, сифилиса, гепатитов. Кроме этого, донор заполняет анкету, где должен подтвердить, что в последние несколько месяцев или даже год (точную цифру не помню) у него не было случайных и опасных связей, он не наркоман, никогда не болел гепатитом, сифилисом и т.д. Но проверяют кровь на наличие именно антител к ВИЧ, а для их образования должно пройти 2-3 месяца, иногда это период затягивается до 4-6 и даже 8 месяцев! По этой же причине после возможного заражения ВИЧ исследование крови при отрицательном результате необходимо повторять через 2 месяца.

Динамика образования антител к ВИЧ:

как зависит количество антигенов (на примере p24) и антител к ВИЧ от времени.

Подробности в тексте.

В иммунологии период от инфицирования до появления значимого (которое можно выявить) количества антител называется «серологическим окном» (serum — сыворотка). То есть по анализам человек здоров, а в реальности — заражен. На рисунке выше вы видите, как изменяется концентрация антител и антигенов ВИЧ с течением времени. Рассмотрим это дело подробнее.

Сразу после инфицирования вирус начинает быстро размножаться (пик антигена p24). Иммунная система знакомится с вирусом (для этого нужно время) и начинает быстро его уничтожать. Появляются антитела, которые охотятся за вирусом и нейтрализуют его. Концентрация вируса в крови падает. В прошлый раз мы говорили, что первыми образуются антитела класса M (IgM), а только потом класса G (IgG). Теперь вируса в крови мало, а антител много (тест ИФА стал положительным). Но годы идут, клетки иммунной системы гибнут. Антител становится меньше, а вируса больше. В конце концов ВИЧ выходит из-под контроля иммунной системы (последний пик p24), наблюдается развернутая картина СПИДа, антител почти нет. Человек умирает от СПИДа.

Как вы уже догадались, «серологическое окно» на рисунке будет от момента заражения до появления IgM. Если кровь у инфицированного донора возьмут кровь в этом «серологическом окне», то по результатам ИФА он будет здоров.

Установлено, что ДНК ВИЧ может находиться в геноме человека как минимум три года без признаков активности и антитела к ВИЧ (по которым обнаруживают вирус) не появляются. Препараты крови такого донора очень опасны: вероятность заражения тут больше 90% при однократной манипуляции. Правда, теперь цельную кровь не переливают, а переливают компоненты крови, а это немного безопаснее. Дело в том, что когда вирус находится только в ДНК лейкоцитов и не проявляет активности, его концентрация в сыворотке крови ничтожна. Компоненты крови могут быть теоретически свободны от вируса.

Есть ли выход? Можно ли выявлять ВИЧ-инфицированных быстро — уже через 1-2 недели после заражения? Ответ: ДА. С помощью ПЦР — полимеразной цепной реакции. В аббревиатуре ПЦР часто переставляют слова, получая ЦПР. Это синонимы.

ПЦР была предложена в 1983 году. Вспомним, что такое вирус: это нуклеиновая кислота (ДНК или РНК) в белковой оболочке. С помощью ПЦР получают много копий нуклеиновой кислоты, которые потом выявляют с помощью меченых ферментов или изотопов, а также по характерному строению. Исходную ДНК вируса нагревают до 95° насек, вследствие чего 2 цепочки ДНК раскручиваются, потом охлаждают и вносят фермент полимеразу, устойчивую к разным температурам. Фермент достраивает недостающие цепочки. Далее смесь снова нагревают, и т.д. Проводятциклов, число копий ДНК возрастает до миллиарда и более.

Это чрезвычайно чувствительный метод, теоретически можно выявить 1 ДНК на 10 мл среды. Но зато и стоимость его составляет около 100 долларов, если не ошибаюсь. На эту цену еще влияет качество реактивов. Сами понимаете, одно дело французские или немецкие, а другое — российские или китайские. Одним словом, с помощью ПЦР в массовом порядке кровь не будут проверять еще долго. ИФА намного дешевле.

Поэтому сейчас при переливании любых компонентов крови больной (или хотя бы родственник) должен написать расписку о том, что ему известны возможные последствия переливания препаратов крови. Замечу, что если больной откажется от переливания, то ему придется написать расписку об отказе и возможных последствиях. Если же пациент без сознания, насколько я знаю, срочный вопрос о переливании крови (гемотрансфузии) решает консилиум врачей. В любом случае, в истории болезни надо на пол-листа написать обоснование к данной процедуре.

Еще один каверзный вопрос: могут ли у больного СПИДом (не просто ВИЧ-инфицированного, а именно больного!) оба теста дать отрицательный результат (то есть показать, что антител к ВИЧ нету)? Ответ такой же: ДА. В последней стадии СПИДа иммунная система настолько поражена, что концентрация антител к вирусу значительно снижается, и антитела могут не определяться. К тому же клеток, в которых может размножаться вирус, тоже остается крайне мало. ВИЧ размножается в особой разновидности лимфоцитов, которые называются T-хелперами (T-помощниками) и принадлежат к лейкоцитам. T-хелперы еще называют CD4 (CD4+) клетками. CD означает рецептор, а число 4 — номер рецептора. СD4+ клетки — это клетки, имеющие рецепторы CD4. А те клетки, которые данного рецептора не имеют, с полным правом могут называться CD4? клетки.

CD4+ клетки и ВИЧ.

В этом рисунке вы сами сможете разобраться, т.к. всё уже обсуждалось.

левая шкала — концентрация CD4 клеток в крови (млн/л)

правая шкала — концентрация вируса в крови

снизу — время (недели и годы)

сверху — стадии: первичная инфекция, скрытый период, стадия СПИДа, смерть.

Текст получился сложный, хотя я и старался объяснить попроще. Как говорил наш зав. кафедрой физики на первом курсе, «мир устроен просто, но не примитивно». 🙂 Поэтому те, кто разобрался с антителами и антигенами ВИЧ, будут довольны, что получили новые знания по злободневной теме. А те, кто не смог или не захотел разбираться, будут радоваться, что не учились в медвузе, где эти темы изучаются еще подробнее.

Дополнение от 15 марта 2008

Если переливать кровь донора, взятую в период «серологического окна», можно заразиться. Поэтому для снижения риска инфицирования цельную кровь сейчас не переливают, а делают из нее компоненты (эритроцитная, лейкоцитная, тромбоцитная масса, плазма) и препараты крови (альбумин, криопреципитат и др.). Лейкоцитная и тромбоцитная масса имеют срок хранения, исчисляемый часами. Эритроцитная масса может храниться не болеедней в зависимости от консерванта. Несмотря на месячный срок хранения, стараются переливать свежую эритроцитную массу, так как она легче переносятся реципиентом (при хранении в ней накапливаются продукты распада эритроцитов).

Препараты крови можно хранить длительно. Например, плазму крови можно хранить в замороженном виде до 2 лет. Поэтому сейчас всю плазму отправляют на 3-месячный карантин (хранение). Спустя 3 месяца у донора повторно берут все анализы, и если антител не обнаружено, плазма считается безопасной, ее размораживают и переливают больному. Такое карантинное хранение служит дополнительной защитой от инфицирования реципиента, хотя 100%-ной надежности добиться нельзя.

Зато в мировой практике придумано и длительно используется переливание аутологичных (собственных) компонентов крови. За некоторое время перед плановой операцией у пациента берут кровь, которую потом можно перелить ему во время операции. Таким образом, переливание собственных компонентов крови — единственный метод со 100% надежностью.

Источник: http://www.happydoctor.ru/info/46

Методы диагностики ВИЧ-инфекции

В настоящее время новые диагностические технологии позволяют выявить этиологические и патогенетические причины многих заболеваний и коренным образом повлиять на результаты лечения. Пожалуй, наиболее впечатляющие результаты внедрения этих технологий в клиническую практику достигнуты в области иммунологии и диагностики инфекционных заболеваний.

Тест-системы на основе иммуноферментного и иммунохемилюминесцентного анализа позволяют выявить антитела различных классов, что значительно повышает информативность методов клинической, аналитической чувствительности и специфичности для диагностики инфекционных заболеваний. Следует отметить, что наиболее значительные успехи в диагностике инфекций связаны с внедрением в лабораторную практику метода полимеразной цепной реакции, который считается «золотым стандартом» в диагностике и оценке эффективности проведенного лечения ряда инфекционных заболеваний.

Для исследования может быть использован различный биологический материал: сыворотка, плазма крови, соскоб, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость (СМЖ). В первую очередь, методы лабораторной диагностики инфекций направлены на выявление таких заболеваний, как вирусный гепатит В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекции, передающиеся половым путем (гонорейная, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная), туберкулез, ВИЧ-инфекция и др.

ВИЧ-инфекция – заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), длительное время персистирующего в лимфоцитах, макрофагах, клетках нервной ткани, в результате чего развивается медленно прогрессирующее поражение иммунной и нервной систем организма, проявляющееся вторичными инфекциями, опухолями, подострым энцефалитом и другими патологическими изменениями.

Возбудители инфекции – вирусы иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов (ВИЧ-1, ВИЧ-2) – относятся к семейству ретровирусов, подсемейству медленных вирусов. Вирионы являются сферическими частицами диаметром 100–140 нм. Вирусная частица имеет наружную фосфолипидную оболочку, включающую гликопротеиды (структурные белки) с определенной молекулярной массой, измеряемой в килодальтонах. У ВИЧ-1 – это gpl60, gpl20, gp41. Внутренняя оболочка вируса, покрывающая ядро, также представлена белками с известной молекулярной массой – р17, р24, р55 (ВИЧ-2 содержит gpl40, gpl05, gp36, р16, р25, р55).

В состав генома ВИЧ входит РНК и фермент обратная транскриптаза (ревертаза). Для того чтобы геном ретровируса соединился с геномом клетки хозяина, вначале с помощью ревертазы происходит синтез ДНК на матрице вирусной РНК. Затем ДНК провируса встраивается в геном клетки-хозяина. ВИЧ обладает выраженной антигенной изменчивостью, значительно превышающей таковую у вируса гриппа.

В организме человека основной мишенью ВИЧ являются Т-лимфоциты, несущие на поверхности наибольшее количество СD4-рецепторов. После проникновения ВИЧ в клетку с помощью ревертазы по образцу своей РНК вирус синтезирует ДНК, которая встраивается в генетический аппарат клетки-хозяина (СD4-лимфоциты) и остается там пожизненно в состоянии провируса. Помимо Т-лимфоцитовхелперов поражаются макрофаги, В-лимфоциты, клетки нейроглии, слизистой оболочки кишечника и некоторые другие клетки. Причиной снижения количества Т-лимфоцитов (клетки CD4) является не только прямое цитопатическое действие вируса, но и их слияние с неинфицированными клетками. Наряду с поражением Т-лимфоцитов у больных с ВИЧ-инфекцией отмечается поликлональная активация B-лимфоцитов с увеличением синтеза иммуноглобулинов всех классов, особенно IgG и IgA, и последующим истощением этого отдела иммунной системы. Нарушение регуляции иммунных процессов проявляется также повышением уровня α-интерферона, β2-микроглобулина, снижением уровня IL-2. В результате нарушения функции иммунной системы, особенно при снижении числа Т- лимфоцитов (CD4) до 400 клеток в 1 мкл крови и менее, возникают условия для неконтролируемой репликации ВИЧ со значительным увеличением количества вирионов в различных средах организма. В результате поражения многих звеньев иммунной системы человек, зараженный ВИЧ, становится беззащитным перед возбудителями различных инфекций.

На фоне нарастающей иммунодепрессии развиваются тяжелые прогрессирующие заболевания, которые не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой. Это заболевания, которые Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определила как СПИД-маркерные или СПИД-индикаторные заболевания.

Первая группа – заболевания, присущие только тяжелому иммунодефициту (уровень СD4 <200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Вторая группа – заболевания, которые могут развиваться как на фоне тяжелого иммунодефицита, так и в ряде случаев без него.

Поэтому в этих случаях необходимо лабораторное подтверждение диагноза.

  • кандидоз пищевода, трахеи, бронхов;
  • внелегочный криптококкоз;
  • криптоспоридиоз с диареей более 1 месяца;
  • цитомегаловирусные поражения различных органов помимо печени, селезенки или лимфоузлов у больного в возрасте старше 1 месяца;
  • инфекция, обусловленная вирусом простого герпеса, проявляющаяся язвами на коже и слизистой оболочке, которые персистируют более 1 месяца, а также бронхитом, пневмонией или эзофагитом любой продолжительности, поражающим больного в возрасте старше 1 месяца;
  • генерализованная саркома Капоши у больных в возрасте до 60 лет;
  • лимфома головного мозга (первичная) у больных в возрасте до 60 лет;
  • лимфоцитарная интерстициальная пневмония и/или легочная лимфоидная дисплазия у детей в возрасте до 12 лет;
  • диссеминированная инфекция, вызванная атипичными микобактериями (микобактерии комплекса М. aviumintracellulare) со внелегочной локализацией или локализацией (дополнительно к легким) в коже, шейных лимфатических узлах, лимфатических узлах корней легких;
  • пневмоцистная пневмония;
  • прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия;
  • токсоплазмоз головного мозга у больных в возрасте старше 1 месяца.
  • бактериальные инфекции, сочетанные или рецидивирующие, у детей в возрасте до 13 лет (более двух случаев за 2 года наблюдения): сепсис, пневмония, менингит, поражение костей или суставов, абсцессы, обусловленные гемофильными палочками, стрептококками;
  • кокцидиоидомикоз диссеминированный (внелегочная локализация);
  • ВИЧ-энцефалопатия (ВИЧ-деменция, СПИД-деменция);
  • гистоплазмоз с диареей, персистирующей более 1 месяца;
  • изоспороз с диареей, персистирующей более 1 месяца;
  • саркома Капоши в любом возрасте;
  • лимфома головного мозга (первичная) у лиц любого возраста;
  • другие В-клеточные лимфомы (за исключением болезни Ходжкина) или лимфомы неизвестного иммунофенотипа: мелкоклеточные лимфомы (типа лимфомы Беркитта и др.); иммунобластные саркомы (лимфомы иммунобластные, крупноклеточные, диффузные гистиоцитарные, диффузные недифференцированные);
  • микобактериоз диссеминированный (не туберкулез) с поражением помимо легких кожи, шейных или прикорневых лимфоузлов;
  • туберкулез внелегочной (с поражением внутренних органов, помимо легких);
  • сальмонеллезная септицемия, рецидивирующая;
  • ВИЧ-дистрофия (истощение, резкое похудение).

В таблице 1 (см. ссылку на источник выше) приведены СПИД-индикаторные заболевания и их этиологические агенты.

Существует много классификаций СПИДа.

Согласно новой классификации, предложенной Центром по контролю за заболеваниями в США (табл. 2 – см. ссылку на источник выше), диагноз СПИДа устанавливается лицам, имеющим уровень CD4-лимфоцитов менее 200/мкл даже при отсутствии СПИД-индикаторных заболеваний.

Категория А включает бессимптомных ВИЧ-серопозитивных лиц, лиц с периферической генерализованной лимфаденопатией, а также острой первичной ВИЧ-инфекцией.

Категория В включает различные синдромы, важнейшие из которых – бациллярный ангиоматоз, орофарингеальный кандидоз, рецидивирующий кандидозный вульвовагинит, трудно поддающийся терапии, цервикальная дисплазия, цервикальная карцинома, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, листериоз, периферическая нейропатия.

Антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в крови

Антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке крови в норме отсутствуют.

Определение антител к ВИЧ является основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В основе метода лежит иммуноферментный анализ (ИФА) – чувствительность более 99,5%, специфичность – более 99,8%. Антитела к ВИЧ появляются у 90–95% инфицированных в течение 1 месяца после заражения, у 5–9% – через 6 месяцев, у 0,5–1% – в более поздние сроки. В стадии СПИДа число антител может снижаться вплоть до полного исчезновения.

Результат исследования выражается качественно: положительный или отрицательный.

Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке крови. Отрицательный результат лаборатория выдает сразу по его готовности. При получении положительного результата – выявлении антител к ВИЧ – во избежание ложноположительных результатов в лаборатории анализ повторяют еще 2 раза.

Вне зависимости от полученных результатов исследования проба крови пациента и результаты 3 исследований направляются лабораторией в региональный центр СПИДа для подтверждения положительного результата или верификации неопределенного результата. В таких случаях окончательный ответ по данному исследованию выдает региональный центр СПИДа.

Иммуноблоттинг на антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови

Антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют.

Метод ИФА по определению антител к ВИЧ является скрининговым. При получении положительного результата для подтверждения его специфичности используется метод иммуноблоттинга – Western-blot – встречная преципитация в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Определяются антитела к вирусным белкам gp41, gpl20, gpl60, р24, pi8, р17 и др.

Согласно рекомендациям Российского центра по профилактике и борьбе со СПИДом обнаружение антител к одному из гликопротеидов gp41, gpl20, gpl60 – следует считать положительным результатом. В случае выявления антител к другим белкам вируса результат считается сомнительным, такого пациента следует обследовать дважды – через 3 и 6 месяцев.

Отсутствие антител к специфическим белкам ВИЧ означает, что иммуноферментный метод дал ложноположительный результат. Вместе с тем, в практической работе при оценке результатов метода иммуноблоттинга необходимо руководствоваться инструкцией, прилагаемой фирмой к используемому «Набору для иммуноблоттинга».

Метод иммуноблоттинга применяется для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.

Антиген р24 в сыворотке крови

Антиген р24 в сыворотке крови в норме отсутствует.

Антиген р24 представляет собой белок стенки нуклеотида ВИЧ. Стадия первичных проявлений после инфицирования ВИЧ является следствием начала репликативного процесса. Антиген р24 появляется в крови спустя 2 недели после инфицирования и может быть выявлен методом ИФА в период от 2 до 8 недель. Через 2 месяца от момента инфицирования антиген р24 исчезает из крови. В дальнейшем в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИДа. Существующие тест-системы ИФА для детекции антигена р24 используются для раннего обнаружения ВИЧ у доноров крови и детей, определения прогноза течения СПИДа и контроля проводимой терапии у больных СПИДом. ИФА обладает высокой аналитической чувствительностью, что позволяет обнаруживать антиген р24 ВИЧ-1 в сыворотке крови в концентрации 5–10 пкг/мл и ВИЧ-2 – менее 0,5 нг/мл, и специфичностью. Однако следует отметить, что уровень антигена р24 в крови подвержен индивидуальным вариациям, а это значит, что только 20–30% пациентов могут быть выявлены с помощью данного исследования в ранний период после инфицирования (Rose N.R. et al., 1997).

Антитела к антигену р24 классов IgM и IgG в крови появляются со 2-й недели, достигают пика в течение 2–4 недель и удерживаются на таком уровне различное время: антитела класса IgM – в течение нескольких месяцев, исчезая в течение одного года после инфицирования, а антитела IgG могут сохраняться годами.

Алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции зависит от фазы заболевания и характеризуется изменением динамики детекционных антител различных классов (рис. 1, 2 – см. ссылку на источник выше).

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и антигена р24 в сыворотке крови.

Отрицательный результат лаборатория выдает сразу по его готовности. При получении положительного результата – выявлении антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и/или антигена р24 – во избежание ложноположительных результатов в лаборатории анализ повторяют еще 2 раза.

Вне зависимости от полученных результатов исследования проба крови пациента и результаты 3 исследований направляются лабораторией в региональный центр СПИДа для подтверждения положительного результата или верификации неопределенного результата. В таких случаях окончательный ответ по данному исследованию выдает региональный центр СПИДа.

Обнаружение ВИЧ методом полимеразной цепной реакции (качественно)

Обнаружение ВИЧ методом полимеразной цепной реакции – ПЦР (качественно) проводится с целью:

  • разрешения сомнительных результатов иммуноблоттингового исследования;
  • для ранней диагностики инфицирования ВИЧ;
  • контроля эффективности противовирусного лечения;
  • определения стадии заболевания СПИДом (переход инфицированности в заболевание).

При первичном инфицировании ВИЧ метод ПЦР позволяет выявить РНК ВИЧ в крови уже спустя 10–14 суток после инфицирования.

Результат исследования выражается качественно: положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие РНК ВИЧ в крови.

Положительный результат – выявление РНК ВИЧ – свидетельствует об инфицировании пациента.

Обнаружение ВИЧ методом полимеразной цепной реакции (количественно)

ВИЧ в крови в норме отсутствует.

Прямое количественное определение РНК ВИЧ с помощью ПЦР позволяет более точно, чем определение содержания клеток CD4, предсказать скорость развития СПИДа у лиц, инфицированных ВИЧ, следовательно – более точно оценить их выживаемость. Высокое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с выраженным нарушением иммунного статуса и низким содержанием клеток CD4. Низкое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с более благополучным иммунным статусом и более высоким содержанием клеток CD4. Содержание вирусной РНК в крови позволяет предсказать переход заболевания в клиническую стадию. При содержании РНК-1 ВИЧ >копий/мл почти у всех пациентов развивается клиническая картина СПИДа (Senior D., Holden Е., 1996).

Вероятность развития СПИДа в 10,8 раз выше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови >копий/мл, чем у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови <копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Группой экспертов США разработаны показания для терапии пациентов с ВИЧ. Лечение показано пациентам с количеством клеток CD4 в крови <300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >копий/мл (ПЦР). Оценка результатов антиретровирусной терапии у лиц, инфицированных ВИЧ, проводится по снижению уровня сывороточной РНК ВИЧ.

При эффективном лечении уровень виремии должен снижаться в 10 раз в течение первых 8 недель и быть ниже предела чувствительности метода (ПЦР) (<500 копий/мл) через 4–6 месяцев после начала терапии.

Таким образом, на сегодняшний день в клиническую практику для диагностики ВИЧ-инфекции внедрены и используются множество методов исследования, как и для всех других вирусных инфекций. Среди них ведущая роль отводится серологическим исследованиям. Основные методы диагностики ВИЧ-инфекций представлены в таблице 3 (см. ссылку на источник выше), где они разделены в зависимости от важности каждого метода для выявления вирусов на четыре уровня:

  • А – тест обычно используется для подтверждения диагноза;
  • В – тест полезен в определенных обстоятельствах для диагностики отдельных форм инфекции;
  • С – тест редко используется для целей диагностики, но имеет большое значение для эпидемиологических обследований;
  • D – тест обычно не используется лабораториями в диагностических целях.

Поскольку для диагностики вирусных инфекций помимо выбора оптимального метода анализа не менее важно правильное определение и взятие биоматериала для исследования, в таблице 4 (см. ссылку на источник выше) приведены рекомендации по выбору оптимального биоматериала для исследования ВИЧ-инфекции.

Для мониторинга ВИЧ-инфицированных следует использовать возможности комплексного исследования иммунного статуса – количественное и функциональное определение всех его звеньев: гуморального, клеточного иммунитета и неспецифической резистентности в целом.

В современных лабораторных условиях многоэтапный принцип оценки иммунологического статуса включает определение субпопуляции лимфоцитов, иммуноглобулинов крови. При оценке показателей следует учитывать, что для ВИЧ-инфекции характерно снижение соотношения CD4/CD8 Т-клеток меньше 1. Индекс CD4/CD8 1,5-2,5 –указывает на нормергическое состояние, более 2,5 – указывает на гиперактивность, менее 1,0 – свидетельствует об иммунодефиците. Также соотношение CD4/CD8 может быть меньше 1 при тяжелом течении воспалительного процесса.

Принципиальное значение это соотношение имеет при оценке иммунной системы у больных СПИДом, потому что ВИЧ избирательно поражает и разрушает СD4-лимфоциты, в результате чего соотношение CD4/CD8 понижается до значений, значительно меньше 1.

Оценка иммунологического статуса опирается также на выявление общих или «грубых» дефектов в системе клеточного и гуморального звена иммунитета: гипергаммаглобулинемия (повышение концентрации IgA, IgM, IgG) или гипогаммаглобулинемия в терминальной стадии; увеличение концентрации циркулирующих иммунных комплексов; снижение продукции цитокинов; ослабление ответа лимфоцитов на антигены и митогены.

Нарушение соотношения популяций в общем пуле В-лимфоцитов характерно для недостаточности гуморального иммунитета. Однако эти изменения неспецифичны для ВИЧ-инфекции и могут возникать и при других заболеваниях. В комплексной оценке ряда других лабораторных показателей следует учитывать, что для ВИЧ-инфекции характерны также: анемия, лимфо- и лейкопения, тромбоцитопения, повышение уровня β2-микроглобулина и С-реактивного протеина, повышение активности трансаминаз в сыворотке крови.

Источник: http://www.antiaids.org/topics/medtopic/metody-diagnostiki-vich-infekcii-10060.html

Антитела к ВИЧ 1 и 2 и антиген ВИЧ 1 и 2 (HIV Ag/Ab Combo)

Антитела к ВИЧ 1 и 2 и антиген ВИЧ 1 и 2 (HIV Ag/Ab Combo) — полное описание диагностики, показания к выполнению, расшифровка результатов.

Антитела к ВИЧ 1 и 2 и антиген ВИЧ 1 и 2 (HIV Ag/Ab Combo) – антитела, образовавшиеся в организме при инфицировании вирусом иммунодефицита человека.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) представитель семейства ретровирусов, он повреждает клетки иммунной системы. Вирус бывает двух типов, ВИЧ-1 встречается чаще, ВИЧ-2 – преимущественно в странах Африки.

ВИЧ встраивается в клетки человека, вирусные частицы размножаются, в результате на поверхности клеток появляются антигены вируса, к которым и вырабатываются соответствующие антитела. Их обнаружение в крови позволяет поставить диагноз ВИЧ-инфекции.

Выявить антитела к вирусу иммунодефицита человека можно через три-шесть недель после проникновения вируса в кровь. Резкое увеличение вируса в крови характерно для стадии первичных проявлений, этот период приходится на третью-шестую неделю с момента инфицирования и называется «сероконверсией». В это время инфекцию можно выявить лабораторно, а клинически она либо не проявляется вообще, либо протекает как простудное заболевание с увеличением лимфатических узлов.

Через 12 недель от момента заражения антитела обнаруживаются практически у всех заболевших. На последней стадии заболевания, называемой СПИД, количество антител уменьшается.

На каком сроке с момента заражения будет обнаружена ВИЧ-инфекция, зависит от тест-системы, применяемой в конкретной лаборатории. Комбинированные тест-системы четвертого поколения обнаруживают ВИЧ-инфекцию через две недели с момента попадания в кровь вируса. А тест-системы первого поколения обнаруживали ВИЧ лишь спустя 6-12 недель.

При выполнении комбинированного анализа возможно выявление антигена р24 ВИЧ, который является капсидом вируса. Он определяется в крови спустя 1-4 недели после инфицирования, ещё до нарастания концентрации антител в крови (до «сероконверсии»). Также при комбинированном исследовании обнаруживаются антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, доступные для диагностики через две-восемь недель после инфицирования.

До сероконверсии в крови обнаруживаются и р24, и антитела к ВИЧ-1, к ВИЧ-2. После сероконверсии антитела связывают антиген р24, поэтому р24 не обнаруживается, а антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 выявляются. Затем в крови снова обнаруживаются и р24, и антитела к ВИЧ-1, к ВИЧ-2. Когда у ВИЧ-инфицированного развивается СПИД, выработка антител нарушается, поэтому антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 могут отсутствовать.

Диагностика ВИЧ-инфекции проводится на этапе планирования беременности и при текущем наблюдении беременной женщины, поскольку ВИЧ-инфекция может передаваться от женщины к плоду во время беременности, в родах и при грудном вскармливании.

Показания к выполнению ВИЧ диагностики

Случайные половые контакты.

Лихорадка без объективных причин.

Увеличение лимфатических узлов в нескольких анатомических областях.

Подготовка к исследованию

Исследование на ВИЧ проводят через 3-4 недели от момента предполагаемого заражения. Если результат отрицателен, анализ повторяют через три и шесть месяцев.

От последнего приёма пищи до взятия крови временной промежуток должен быть более восьми часов.

Накануне исключить из рациона питания жирные продукты, не принимать спиртные напитки.

За 1 час перед взятием крови на анализ нельзя курить.

Не рекомендуется сдавать кровь сразу после выполнения флюорографии, рентгенографии, УЗИ, физиотерапевтических процедур.

Кровь на исследование сдают утром натощак, исключается даже чай или кофе.

Допустимо пить обычную воду.

Заминут до исследования пациенту рекомендован эмоциональный и физический покой.

Материал для исследования

Расшифровка результатов ВИЧ диагностики

Анализ является качественным. Если антитела к ВИЧ не обнаружены, в ответе указано «отрицательно».

Если антитела к ВИЧ обнаруживаются, анализ повторяют с другой серией тестов. Повторный положительный результат требует проведения исследования методом иммуноблота, «золотого стандарта» ВИЧ-диагностики.

  1. Человек не инфицирован ВИЧ.
  2. Терминальная стадия ВИЧ-инфекции (СПИД).
  3. Серонегативный вариант ВИЧ-инфекции (позднее образование антител к ВИЧ).
  1. Человек инфицирован ВИЧ.
  2. Тест не информативен у детей до полутора лет, рождённых от ВИЧ-инфицированных матерей.
  3. Ложноположительный результат при наличии в крови антител к вирусу Эпштейна-Барр, главному комплексу гистосовместимости, ревматоидному фактору.

Выберите беспокоящие вас симптомы, ответьте на вопросы. Выясните, насколько серьезна ваша проблема и нужно ли обращаться к врачу.

Перед использованием информации, предоставляемой сайтом medportal.org, пожалуйста, ознакомьтесь с условиями пользовательского соглашения.

Пользовательское соглашение

Сайт medportal.org предоставляет услуги на условиях, описанных в настоящем документе. Начиная пользоваться веб-сайтом Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения до начала пользования сайтом, и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме. Пожалуйста, не пользуйтесь веб-сайтом, если Вы не согласны с данными условиями.

Вся информация, размещённая на сайте, носит справочный характер, информация взята из открытых источников является справочной и не является рекламой. Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск лекарственных средств в данных, полученных от аптек в рамках соглашения между аптеками и сайтом medportal.org. Для удобства пользования сайтом данные по лекарственным средствам, БАД систематизируются и приводятся к единому написанию.

Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск клиник и другой информации медицинского характера.

Размещенная в результатах поиска информация не является публичной офертой. Администрация сайта medportal.org не гарантирует точность, полноту и (или) актуальность отображаемых данных. Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от доступа или невозможности доступа к сайту или от использования или невозможности использования данного сайта.

Принимая условия настоящего соглашения, Вы полностью понимаете и соглашаетесь с тем, что:

Информация на сайте носит справочный характер.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно заявленного на сайте и фактического наличия товара и цен на товар в аптеке.

Пользователь обязуется уточнить интересующую его информацию телефонным звонком в аптеку или использовать предоставленную информацию по своему усмотрению.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно графика работы клиник, их контактных данных – номеров телефонов и адресов.

Ни Администрация сайта medportal.org, ни какая-либо другая сторона, вовлеченная в процесс предоставления информации, не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от того, что полностью положились на информацию, изложенную на этом веб-сайте.

Администрация сайта medportal.org предпринимает и обязуется предпринимать в дальнейшем все усилия для минимизации расхождений и ошибок в предоставленной информации.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия технических сбоев, в том числе в отношении работы программного обеспечения. Администрация сайта medportal.org обязуется в максимально короткие сроки предпринять все усилия для устранения каких-либо сбоев и ошибок в случае их возникновения.

Пользователь предупрежден о том, что Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за посещение и использование им внешних ресурсов, ссылки на которые могут содержаться на сайте, не предоставляет одобрения их содержимого и не несет ответственности за их доступность.

Администрация сайта medportal.org оставляет за собой право приостановить действие сайта, частично или полностью изменить его содержание, внести изменения в Пользовательское соглашение. Подобные изменения осуществляются только на усмотрение Администрации без предварительного уведомления Пользователя.

Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения , и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме.

Рекламная информация, на размещение которой на сайте имеется соответствующее соглашение с рекламодателем, имеет пометку «на правах рекламы».

Источник: http://medportal.org/analyzes/antitela-k-vich-1-i-2-i-antigen-vich-1-i-2-hiv-agab-combo.html

Сроки появления и обнаружения антител к ВИЧ

Информация о том, через сколько появляются антитела к ВИЧ, интересует большинство людей. Ведь лица, профессионально неосведомленные в этом вопросе считают, что конкретно с этого момента заболевание определяется при помощи анализов, а значит, человеку может быть поставлен диагноз, который необходим для того, чтобы как можно раньше приступить к лечению. На самом деле все обстоит не так. И время, когда в организме появляются первые антитела к ВИЧ, не совпадает со сроками обнаружения данного недуга. Определить их можно только тогда, когда их станет много.

Антитела к ВИЧ появляются через неделю после инфицирования: правда или вымысел?

Четко сказать о том, когда появляются антитела к ВИЧ, не может никто. Опыты и исследования ученых и специалистов в области медицины, занимающихся изучением данного недуга, позволили сделать выводы о том, что случается это приблизительно через семь суток после того, как недуг попадает в кровоток. То, через какое время появляются антитела к ВИЧ, зависит от целого ряда сопутствующих факторов. Речь идет о том, в каком количестве инфекция попала в организм носителя, а также о том, через сколько клетки вируса станут проявлять активность.

Появление антител к ВИЧ после заражения начинается после того, как инфекция начнет воспроизводить новые клетки и разрушать белки иммунной системы. Последние носят название CD-4. В организме здорового человека они играют особую роль. Речь идет о том, что эти клетки предназначены для защиты организма. Изначально организм справляется с недугом своими силами. Клетки вируса при этом уничтожаются благодаря лейкоцитам. Через сколько времени появляются антитела к ВИЧ? Они возникают через несколько дней или недель после инфицирования. Но количественный их состав изначально не слишком велик. Концентрация АТ в крови мала, а значит, не видна при заборе анализа и дальнейшем исследовании материала.

Через сколько недель определяются антитела к ВИЧ: рекомендованные специалистами сроки проверки

Наиболее ранний срок обнаружения антител к ВИЧ составляет три недели. Но это не значит, что спустя двадцать один день с момента возможного заражения следует идти на проверку. Проверяться на антитела к ВИЧ рекомендуется приблизительно через тридцать дней. В некоторых случаях даже данный срок является недостаточным. Возможность обнаружения опасного заболевания зависит от особенностей организма человека и от ряда других факторов. Медицине известны случаи, когда обнаружить вирус иммунодефицита удалось только через полгода после заражения.

После того, как инфекция попадает в организм, начинается выработка АТ. Как правило, через четыре – пять недель их становится возможным обнаружить. В медицине есть специальный термин, предназначенный для обозначения периода, когда организм не справляется с вирусом и АТ становится достаточно для определения посредством анализа. Речь идет о сероконверсии. Чаще всего она совпадает с началом периода ранних проявлений вируса иммунодефицита. То, через какое время появляются антитела к ВИЧ, определить возможно не всегда. Однако современной медицине удается выявить предполагаемое время инфицирования по количественному составу антител и реакции организма на них.

Антитела ВИЧ через 3 месяца обнаруживаются гарантированно, так же, как и через месяц или пять недель. Для диагностики вируса иммунодефицита посредством выявления в сыворотке или плазме крови АТ, используется иммуноферментный анализ. Его также называют ИФА-тестированием. В современной медицине применяется ИФА четвертого поколения. Это сверхчувствительное тестирование, которое способно выявить опасный недуг на самых ранних сроках. С помощью анализа такого типа удается выявить здоровых людей, а также тех, у кого диагноз вирус иммунодефицита ставится под вопрос. Для дальнейшего выявления инфекции применяется более точная диагностика. Ведь АТ положительные на бланке анализа еще не значат, что человек инфицирован. Организм иногда вырабатывает их ошибочно, Например, при заболевании почек или патологиях иммунной системы.

Источник: http://www.zppp.saharniy-diabet.com/vich-spid-1/diagnostika-2/sroki-3