Количественное определение вируса гепатита с

Разновидности и необходимость применения исследований методом ПЦР



Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации.

Оглавление:

Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь. Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет. Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

Разновидности исследований методом ПЦР

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:


  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.



Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

Источник: http://apechen.ru/diagnostika/virus-gepatita-s-kolichestvennyj-analiz.html

РНК вируса гепатита С, количественное определение

Поиск по алфавиту

Что такое РНК вируса гепатита С, количественное определение?

Количественное определение РНК вируса гепатита методом ПЦР.



Аналитические показатели: выявление РНК вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в плазме крови.

Определяемый фрагмент — консервативный участок генома вируса гепатита С. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения — от 600 МЕ/мл вирусных частиц в плазме крови.

Почему важно делать РНК вируса гепатита С, количественного определения?

Количественная характеристика содержания РНК вируса гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х105 МЕ/мл (2х106 копий/мл), то прогноз курса лечения благоприятный, если выше — то рекомендуют использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х105 МЕ/мл (2х10° копий/мл) наряду с определением генотипа вируса является независимым и самым точным параметром эффективности лечения. Снижение концентрации РНК вируса гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.

При каких симптомах делается РНК вируса гепатита С, количественное определение?

Показания к назначению анализа:

  • Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.
  • Определение тактики лечения пациентов.
  • Точная оценка эффективности лечения.

Для проверки/улучшения работоспособности каких органов нужно делать РНК вируса гепатита С, количественного определения?

Как подготовиться к сдаче РНК вируса гепатита С, количественного определения?

Взятие крови желательно производить натощак.



Материал для сдачи РНК вируса гепатита С, количественного определения

Венозная кровь (с ЭДТА) (наиболее информативный материал — биопсия печени).

Хранение материала: не более 24 часов при +4°С.

Срок выполнения РНК вируса гепатита С, количественного определения

К каким докторам следует обращаться для консультаций по РНК вирусу гепатита С, количественному определению?

Вас что-то беспокоит? Вы хотите узнать более детальную информацию о РНК вирусе гепатита С, количественном определении или других анализах? Или же Вам необходим осмотр врача? Вы можете записаться на прием к доктору – клиника Eurolab всегда к Вашим услугам! Лучшие врачи осмотрят Вас, проконсультируют, окажут необходимую помощь и поставят диагноз. Вы также можете вызвать врача на дом. Клиника Eurolab открыта для Вас круглосуточно.

Телефон нашей клиники в Киеве: (+3(многоканальный). Секретарь клиники подберет Вам удобный день и час визита к врачу. Наши координаты и схема проезда указаны здесь. Посмотрите детальнее о всех услугах клиники на ее персональной странице.

Если Вами ранее были выполнены какие-либо исследования, обязательно возьмите их результаты на консультацию к врачу. Если исследования выполнены не были, мы сделаем все необходимое в нашей клинике или у наших коллег в других клиниках.



Необходимо очень тщательно подходить к состоянию Вашего здоровья в целом. Есть много болезней, которые по началу никак не проявляют себя в нашем организме, но в итоге оказывается, что, к сожалению, их уже лечить слишком поздно. Для этого просто необходимо по несколько раз в год проходить обследование у врача, чтобы не только предотвратить страшную болезнь, но и поддерживать здоровый дух в теле и организме в целом.

Если Вы хотите задать вопрос врачу – воспользуйтесь разделом онлайн консультации, возможно Вы найдете там ответы на свои вопросы и прочитаете советы по уходу за собой. Если Вас интересуют отзывы о клиниках и врачах – попробуйте найти нужную Вам информацию на форуме. Также зарегистрируйтесь на медицинском портале Eurolab, чтобы быть постоянно в курсе последних новостей и обновлений информации на сайте о РНК вирусе гепатита С, количественном определении и других анализах на сайте, которые будут автоматически высылаться Вам на почту.

Если Вас интересуют еще какие-нибудь анализы, диагностики и услуги клиник в целом или у Вас есть какие-либо другие вопросы и предложения – напишите нам, мы обязательно постараемся Вам помочь.

Источник: http://www.eurolab.ua/services/268/

Диагностика вируса гепатита С

Вирус гепатита С (ВГС) – является РНК-содержащим вирусом из семейства Flaviviridae. Эта инфекция способна размножаться в клетках крови (моноцитах, нейтрофилах, В-лимфоцитах и макрофагах), а также поражать клетки самой печени – гепатоциты. Благодаря высокой степени мутационной активности данный тип гепатита способен избегать воздействия иммунной системы человека.

Есть 11 генотипов и масса субтипов такого вируса, которые отличаются степенью поражения печени и влияют на сроки лечения гепатита. Подобное разнообразие гепатита С требует различных методик противовирусной терапии. К примеру, гепатит 1-го и 4-го генотипов необходимо лечить 48 недель, а для курса терапии против вирусов 2-го и 3-го видов может потребоваться лишь 24 недели.

После того, как экспресс-тест на гепатит С дал положительный результат, проводят анализ ПЦР с целью выявления РНК данного вируса в пробах крови.

ПЦР-диагностика

Полимеразной цепной реакцией (ПЦР) называется экспериментальная методика для выявления вирусов. Такой анализ на гепатит С позволяет существенно увеличить концентрацию некоторых фрагментов ДНК или РНК вируса в сданных пробах. Это дает возможность их распознать и даже подсчитать количество.

Данный тест на гепатит С выполняют по следующей методике:

  1. Проба крови (генетический материал), который может содержать искомый ген гепатита, вносится в пробирку. К ней помещают специальные вещества – праймеры, они представляют собой отрезки небольшой длины из искомого гена, которые синтезированы химическим путем. В данный сосуд также добавляется ДНК или РНК полимераза, она способна выстраивать цепочки из нуклеиновой кислоты, полностью идентичные первоначальной. К полученному составу добавляется и подборка из свободных нуклеотидов, являющихся особым строительным материалом для ДНК и РНК, причем один из них содержит мельчайшие частицы из радиоактивного фосфора.
  2. Полученная смесь вначале подогревается до 95 градусов, вследствие чего переплетенные в обычном состоянии обе спирали ДНК из-за такого воздействия расплетаются.
  3. Для продолжения анализа препарат охлаждается, в этот момент праймеры прикрепляются к искомому участку генома вируса гепатита, не позволяя ДНК сформироваться в двойную спираль. Когда происходит остывание смеси, полимераза отыскивает именно одиночные цепочки из нуклеотидов. Во время прикрепления данного фермента он скользит по цепи ДНК (как блок по веревке), а на двойной спирали он не способен «работать», для этого и проводят подогрев смеси.
  4. Чтобы продлить анализ, выполняют повторное нагревание, которое вновь приводит к разделению цепочек нуклеотидов. При выполнении таких циклов ПЦР в пробе количество искомых генов гепатита возрастает в геометрической пропорции, а остальные генетические материалы продуцируются (формируются) лишь в линейной закономерности.
  5. Для завершения исследования проводят очистку раствора от остаточных частиц нуклеотидов. Их разделяют с помощью электрофореза, при этом происходит отделение по параметрам молекулярной массы цепочек ДНК. Такие анализы на гепатит с при помощи ПЦР позволяют определить, присутствуют искомые гены вируса в исследуемом образце или нет.

Достоинством данного теста является очень высокий порог чувствительности реакции ПЦР. Такой методике для проведения диагностики, в идеальном варианте, требуется всего одним геном вируса на всю пробу.



Кроме того, такая ПЦР полностью специфична. В каждом из генов есть уникальная последовательность из нуклеотидов, которая, как отпечаток пальца, не может нигде повторяться. Для этого анализа на гепатит С праймеры синтезируются таким образом, чтобы они абсолютно соответствовали уникальным участкам искомых генов, которых нет ни у одной другой последовательности.

Данная методика позволяет также провести анализ на гепатит в с и детерминировать их, помогая установить окончательный диагноз.

Такой лабораторный анализ позволяет получить информацию большую, чем просто наличие или отсутствие РНК вируса гепатита С либо другого типа в пробах крови. Определяя параметр радиоактивного излучения, существует и возможность выявлять, сколько искомого генетического материала изначально находилось в исследуемом образце. Это позволяет определить параметр так называемой вирусной нагрузки – концентрации частиц РНК гепатита в определенном объеме.

Качественный анализ ПЦР

Данный анализ позволяет определить факт наличия вируса гепатита в пробах крови. Его необходимо проводить для всех людей, у которых были обнаружены антитела к гепатиту.

В результате проведения такого исследования могут быть только два значения:


  • «Обнаружено». Такой положительный результат теста интерпретируется следующим образом: в анализируемом образце из биологического материала были найдены фрагменты РНК вируса гепатита. Из этого следует, что был факт инфицирования пациента данным вирусом. Это может свидетельствовать о том, что возбудитель гепатита размножается в организме и заражает новые клетки, разрушая печень.
  • «Не обнаружено». Этот результат говорит, что в образце, который анализировался в данной лаборатории, не были обнаружены фрагменты РНК, которые специфичны для вируса гепатита С. Есть также вероятность, что концентрация РНК вируса-возбудителя в исследуемом образце была настолько мала, что тест не смог ее выявить. В таких случаях говорят, что уровень концентрации находится ниже порога чувствительности анализа.

Такой тест может быть также и ложноположительным или ложноотрицательным, из-за загрязнения биоматериала или наличия в пробах специфических веществ, реагирующих с химическими компонентами, необходимыми для проведения анализа.

Следует подчеркнуть, что в острых фазах гепатита С качественное исследование по методу ПЦР может выявлять его РНК уже после 1-2 недель от момента инфицирования организма. Это значит, что выявлять болезнь можно задолго до проявления ее внешних симптомов или появления в организме антител к гепатиту.

Забор крови (из вены) желательно выполнять натощак.

Количественный анализ ПЦР

При помощи данного анализа определяют уровень концентрации вируса гепатита у больного (вирусную нагрузку). Такой тест нужно сдать, чтобы оценить количество РНК вируса в единице определенного объема.

Расшифровка анализов на гепатит с, проведенная по такой методике, может иметь следующие результаты:


  • Количественный показатель (в цифрах)

Концентрация вируса (количество) приводится в цифровом выражении. Для этого используются разные показатели единиц измерения: либо МЕ/мл (международная единица на миллилитр), либо копий/мл (количество копий РНК вируса в миллилитре). В среднем 1 МЕ/мл соответствует 4 копиям/мл, поскольку разные тест системы имеют различные коэффициенты перевода таких единиц измерения.

Низким уровнем вирусной нагрузки считают значения данного анализа меньшеМЕ/мл, а высоким является показательМЕ/мл.

Такая количественная оценка позволяет определить уровень инфекционности заболевания («заразность») больного. Чем больше этот показатель анализа, тем выше вероятность риска передачи возбудителя другим людям (при половом контакте или вертикальным путем).

Этот вердикт означает, что количественный метод не смог обнаружить РНК гепатита, однако сам вирус присутствует в организме, только в очень малой концентрации. Это было подтверждено проведением дополнительного качественного анализа ПЦР, и он своим положительным результатом свидетельствует о факте присутствия гепатита.

  • Результат «Не обнаружено»

    Данная положительная расшифровка анализа говорит о том, что сам количественный тест в пробе крови не смог обнаружить специфических РНК частиц вируса гепатита С.

  • Количественный анализ ПЦР, проводимый на разных сроках противовирусной терапии (1-я, 4-я, 12-я и 24-я недели) позволяет судить об эффективности лечения и делать необходимые поправки.

    

    Специфика анализа

    Данный тест нужно сдать, чтобы определить различные генотипы гепатита С. В настоящее время известно 11 генотипов данного возбудителя и множество субтипов. В нашей стране распространены генотипы гепатита С 1-го, 2-го и 3-го видов. В лабораториях могут выявлять разнообразные субтипы этих видов: 1а, 1в, 2а, 2в, либо 3, 4, 5, 6 генотипы с различными модификациями субтипов. Для всех этих гепатитов специфичность определения составляет 100%.

    Уточнение модификации генотипа дает возможность подбирать соответствующее лечение. Наличие у больного тех или иных видов генотипа не свидетельствует от том, что заболевание легче или сложнее, они являются лишь разновидностями вируса гепатита, и не больше.

    В тех случаях, когда в лаборатории не могут выделить генотип вируса, может быть выдан результат: «Не типируется. Были исследованы генотипы: такие-то» (к примеру, 1а, 2в, 3ав). Эта расшифровка говорит о том, что в данной лаборатории не было соответствующих реагентов, которые смогли бы детерминировать генотип вируса гепатита. При исследовании проводилась проверка на вирусы, данные в перечне, но соответствия их с образцами РНК не были выявлены.

    Чтобы поставить окончательный диагноз, недостаточного лишь одного вида анализа. Каждый из тестов может дать ложноположительный результат. Для точного определения типа гепатита и степени поражения этой инфекцией организма проводят комплексное исследование. При этом делается биопсия печени и тестирование ее ферментов: АлАТ, АсАТ, а также ЩФ и ЛДГ. Может выполняться также тест на билирубин и анализ протромбинового индекса.

    Лишь комплекс таких тестов и лабораторных исследований, с общим анализом состояния больного поможет определить наличие гепатита в организме, его форму, а также степень выраженности. На их основании доктор может определить дальнейшее лечение и сделать возможный прогноз для больного.

    Источник: http://veneradoc.ru/gepatity/rnk-virusa-gepatita-s.html

    

    ПЦР гепатита С

    Оставьте комментарий 11,647

    Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С. Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах. Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

    Что такое ПЦР?

    Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения. Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

    Виды метода ПЦР

    Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

    Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

    

    Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

    Особенности количественного ПЦР анализа

    Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

    Показания

    Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

    • определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;
    • качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;
    • нахождение острого и хронического гепатита С;
    • существование микст-гепатитов;
    • при планировании лечения;
    • если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

    Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

    Для чего проводится на различных этапах течения болезни?

    На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

    

    Расшифровка

    После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

    Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

    Норма количественного анализа на гепатит С

    Когда человек здоров, норма есть — «не обнаружено». У заболевших людей нормой будет снижение дозы вируса в результатах на логарифмическую единицу, что проявляется убыванием числа нулей в анализе на один (например, с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл). Рамки диапазона концентрации вируса, что определяет амплификатор, находятся в границах 1,8*102 — 2,4*107 МЕ/мл. Трактовка исхода:

    • низкая концентрация — от 600 МЕ/мл до 3*104 МЕ/мл;
    • средняя — от 3*104 МЕ/мл до 8*105 МЕ/мл;
    • высокая — выше 8*105 МЕ/мл.

    Отклонения

    При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса. На получение недостоверного результата могут повлиять отдельные факторы, например, загрязнение образцов; присутствие в крови гепарина и веществ, замедляющих действие компонентов ПЦР; ошибки лабораторий; несоблюдение правил проведения теста.

    Также результат в нескольких лабораториях может различаться, возможно, была другая методика проведения исследований. Чтобы узнать, насколько поражена печень и опасность болезни, недостаточно провести количественный ПЦР гепатита. Дополнительно проходят биохимические процедуры и биопсию.

    Планируя лечение, проводят генотипирование вируса. В связи с тем, что гепатит С способен изменяться, существует несколько групп. Для разных типов лечение может отличаться. Бывают ситуации, когда присутствует несколько видов, но анализ находит один, тот, что преобладает. Тогда тест пересдают.

    

    Плюсы метода

    Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение. Плюсы методики:

    • Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.
    • Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга. Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.
    • Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.
    • Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вируОписание итогаса.
    • Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.
    • Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.
    • https://www.youtube.com/watch?v=lBi-d6jAKxQ

    Посредством этого исследования провести диагностику могут каждому для удостоверения факта отсутствия болезни. Но для достоверных фактов нужно четко соблюдать инструкции. ПЦР используют в разных отраслях: криминалистике, для установления отцовства, для диагностирования различных вирусов, для выявления аллергии на лекарства, клонировании генов, мутагенезе, секвенирование ДНК.

    Источник: http://infopechen.ru/gepatity/diagnostika/kolichestvennyj-analiz-na-gepatit-c.html

    Какие нормы при количественном анализе на гепатит С?

    Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса. При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно. Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

    Определение вируса гепатита С

    Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни. Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др. Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

    

    Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

    Субтипы могут производить различные модификации, поэтому специфика и чувствительность анализатора должна быть на сто процентов. Помимо обнаружения болезни у пациента, необходимо определить степень его тяжести. Некоторые лаборатории не имеют полностью всех данных по расшифровкам РНК-вируса, есть вероятность ложноположительного ответа.

    Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

    Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

    Виды анализа на гепатит С

    Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

    

    Могут проявиться возбудители инфекционных заболеваний. Такое инфекционное заболевание печени, как гепатит С, в наше время поддается лечению, когда его своевременно обнаруживают. При подозрении на наличие вируса делают ПЦР анализ.

    При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни. Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика. Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

    Качественный и количественный анализ

    Различают анализ качественный и количественный. Суть первого в том, что он определяет присутствие инфекции в крови. А это значит вирус поражает здоровые клетки печени. При обнаружении у больного антител к гепатиту С сразу проводят качественный тест. Норма, которую должен выдать результат – это «в крови не обнаружено». При определении концентрации вируса есть необходимость в знании чувствительности диагностической системы, так как анализ могут делать люди, проходящие противовирусную терапию. Степень чувствительности анализатора не должна быть менее 50 МЕ/мл.

    При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

    

    Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

    Важно на первых этапах обнаружить степень концентрации гепатита, чтобы определиться с темпами реабилитации. Если норма гепатита С превышена на более, чем 800 тысяч МЕ/мл, она считается завышенной, при увеличении до одного миллиона – критической. Если количественный диапазон менее 400 тысяч МЕ/мл, считается, что заражение окружающих произойдет с меньшей вероятностью. Такая цифра дает понять, что гепатит С в организме присутствует в очень маленьких дозах. Анализ не смог определить количественное значение РНК частиц вируса, поэтому его назначают повторно несколько раз для точности диагноза.

    Результаты количественного анализа

    Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.

    Результаты анализа ПЦР:

    1. Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток.
    2. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

    Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

    Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.

    

    Источник: http://pechen1.ru/gepatit/c/kolichestvennyiy-analiz.html

    Medinfo.club

    Портал о Печени

    Количественный анализ на HCV и его расшифровка

    Гепатит С — это заболевание, способное размножаться в здоровых клетках печени и провоцировать появление пролиферативных болезней. В современном мире, когда вирус гепатита прошел определенную мутацию, человеческая иммунная система стоит под угрозой, так как по сравнению с инфекцией, она ничтожна. Также стоит отметить, что не у всех больных будут наблюдаться первые признаки заболевания, тем более на ранних стадиях.

    РНК анализ вируса гепатита С — это количественное исследование, норма которого заключается в умеренном количестве присутствия вирусных клеток в крови пациента. Согласно статистике, около 31% больных полностью излечиваются от данного недуга, если он находится на начальной стадии.

    Во врачебной практике доктора отмечают, что у 4 млн инфицированных симптомы и первые признаки вовсе не появляются, хотя запущенная форма гепатита может привести к циррозу печени или раку.

    

    В настоящий момент при проведении процедуры “переливание крови”, данную кровь проверяют на наличие вируса гепатита С, так как данное заболевание передается через донорскую кровь.

    На сегодняшний день, в мире уже появились препараты от гепатита С с эффективностью приближенной к 100% Современная фарм промышленность создала лекарства, которые практически не имеют побочных эффектов. Многие пациенты получают первые результаты в виде облегчения симптомов и снижения вирусной нагрузки уже через неделю приёма. Подробнее о препаратах от гепатита с индийского производства читайте в нашей отдельной статье.

    На рынке компаний по перевозке индийского лекарства от гепатита С “Sofosbuvir Express” отлично зарекомендовала себя. Данная компания успешно помогает людям излечиться от недуга больше 2-х лет. Отзывы и видео довольных пациентов вы можете посмотреть здесь. На их счету более 4000 людей, которые выздоровели благодаря купленным препаратам. Не откладывайте свое здоровье в долгий ящик, перейдите на сайт www.sofosbuvir-express.com или позвоните по номеру-59-21

    Виды ПЦР исследований

    ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного.

    Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток.

    Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

    Поэтому ПЦР делится на несколько видов:

    • качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
    • количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни.Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

    Отличия качественного и количественного анализов

    Вирус гепатита С — диагностируется прежде всего путем проведения количественного анализа, расшифровка которого необходима для правильной интерпретации болезни. Но несмотря на это, качественный и количественный метод диагностики имеют свои отличия, например: роль и поставленные задачи перед исследованиями — качественный — подтверждает присутствие инфекции после обнаруженных антител вируса, а количественный — вторичный метод, опровергающий или подтверждающий болезнь, чтобы поставить правильный и единственный диагноз.

    Расшифровка количественного исследования

    После проведения диагностики, интерпретировать полученный результат могут только врачи, так как он изображен должен быть не в цифрах, а в словах. Согласно статистике, количественный ПЦР — это самый чувствительный анализ. Для того чтобы понять присутствует ли в организме вирус ,необходимо понимать и знать, что количественный анализ на гепатит С расшифровывается с помощью цифрового обозначения (норматива) инфекции:

    Источник: http://medinfo.club/rnk-virusa-gepatita-s-kolichestvennoe-issledovanie-i-ego-norma/

    Что такое РНК вируса гепатита С?

    Исследование РНК вируса гепатита С является наиважнейшей процедурой, которая позволяет с большой точностью устанавливать длительность и методы лечения больных. Диагностика заболевания состоит из нескольких различных исследований крови, таких как:

    • маркеры гепатита С (анти-HCV);
    • определение РНК вируса гепатита С (РНК HCV).

    Первое исследование делается при первом подозрении на гепатит. Второй вариант является наиболее значимым при лечении HCV РНК, поэтому рассмотрим его более подробно.

    Что такое вирусный гепатит С?

    Вирусный гепатит C, или HCV, это инфекционная болезнь, поражающая печень. Заражение вирусом происходит через кровь. Заразиться можно, делая переливание крови, когда не соблюдаются правила по стерилизации медицинских инструментов. Реже встречаются случаи, когда заболевание получается половым путем или от беременной матери к плоду. Гепатит С бывает 2-х типов.

    Хронический гепатит С наиболее опасен. Это форма болезни, которая может длиться на протяжении всей жизни. Она приводит к серьезным проблемам функционирования печени, таким как цирроз либо рак. У 70-90% инфицированных людей болезнь переходит в хроническую стадию.

    Важнейшая опасность гепатита С состоит в том, что он протекает скрытно, без желтушных признаков. При этом чаще всего жалуются на поднятие температуры, тошноту и рвоту, физическую слабость, повышенную утомляемость, потерю аппетита и веса. При этом на фоне небольшого уплотнения тканей печени достаточно часто происходит ее злокачественное перерождение. По этой причине вирусный гепатит С зачастую называют «бомбой замедленного действия» или «ласковым убийцей».

    Другая особенность болезни заключается в очень медленном ее развитии, исчисляемом десятками лет.

    Как правило, заразившиеся не ощущают никаких симптомов и не подозревают о своем истинном состоянии. Часто заболевание можно выявить только при обращении к врачу по другому вопросу.

    К группе риска относятся:

    • дети, получившие вирус гепатита С от матерей;
    • наркоманы;
    • люди, прокалывавшие части тела или сделавшие татуировки нестерильными инструментами;
    • получившие донорскую кровь либо органы (до 1992 года, когда гемодиализ не проводился);
    • лица, инфицированные ВИЧ;
    • медицинские работники, контактирующие с инфицированными пациентами.

    Определение РНК гепатита С

    Определение РНК вируса гепатита С, также именуемый ПЦР гепатита С, это исследование биологического материала (крови), с помощью которого можно определить в организме непосредственное наличие самого геноматериала вируса гепатита (любой отдельно взятый вирус является одной-единственной частичкой РНК).

    Основной метод проведения теста — ПЦР, или метод полимеразно-цепной реакции.

    Существуют два вида тестов крови на определение РНК HCV:

    Качественный тест

    Проведение качественного анализа дает возможность определить, находится ли вирус в составе крови. Все пациенты, у которых найдены антитела С-гепатита, должны пройти данный тест. По его результатам можно получить 2 ответа: «присутствует» либо «отсутствует» вирус. По положительному результату теста (обнаружено) можно судить об активном размножении вируса, который заражает здоровые клетки в печени.

    Тест, проводимый на качественный ПЦР, настроен на конкретную чувствительность, от 10 до 500 МЕ/мл. Если обнаруженный в составе крови вирус гепатита при удельном содержании меньше 10 МЕ/мл, то обнаружение вируса может стать невозможным. Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия. Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции.

    Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител. Последующие тесты, при прохождении противовирусной терапии, проводятся на 4-ю, 12-ю и 24-ю недели. И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Затем — один раз в год.

    Количественный тест

    Количественный анализ ПЦР РНК, иногда называемый вирусной нагрузкой, определяет концентрацию (удельное содержание) вируса в составе крови. Другими словами, под вирусной нагрузкой понимается определенное количество вирусной РНК, которое может находиться в конкретном количестве крови (принято использовать 1 мл, равный 1 см в кубе). Единицы измерения для результатов теста — международные (стандартные) единицы, разделенные на один миллилитр (МЕ/мл). Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл.

    Необходимо понимать, что нет никакой конкретной зависимости в степени тяжести C-гепатита от концентрации данного штамма в составе крови.

    Проверка «вирусной нагруженности» позволяет определить степень инфекционности заболевания. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения. Поэтому малая вирусная нагрузка является очень благоприятным фактором для успешного лечения.

    К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. На основании результатов теста осуществляется планирование курса реабилитации. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

    В современной медицине считается, что нагрузка большеME/мл является высокой. Нагрузка же сверхME/мл считается критической. Но у специалистов из разных стран и по сей день не появилось одинакового мнения о пределах вирусной нагрузки.

    Частота проведения количественного теста

    В общих случаях количественный анализ на гепатит делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии.

    В качестве результата для количественного теста станет считаться количественная оценка результатов по образцу, указанному выше. В результате будет вынесен вердикт «ниже измеряемого диапазона» или «в крови не обнаружено».

    Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа. Расшифровка «Отсутствующий» показывает, что оба вида анализов не нашли РНК вируса. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

    Гепатит C и его генотипы

    Генотипирование РНК вируса гепатита C диагностирует присутствие разных генетических типов гепатита С. Науке известно более 10 типов генома вируса, но для медицинской практики достаточно выделить несколько генотипов, имеющих наибольший удельный вес в регионе. Определение генетического типа играет ключевую роль при выборе сроков лечения, что очень необходимо, если принять во внимание обширный спектр побочных эффектов лекарств от гепатита.

    Способы лечения вирусного гепатита С

    Единственным действенным способом вылечить вирус гепатита, как правило, оказывается сочетание 2-х медпрепаратов: интерферона-альфа совместно с рибавирином. По отдельности эти лекарства не так эффективны. Рекомендуемые дозировки лекарств и сроки применения должны назначаться только врачом и индивидуально каждому пациенту. Лечение этими лекарствами может растянуться на срок от 6 до 12 месяцев.

    Сегодня не изобретено препаратов, гарантирующих стопроцентное выздоровление от вируса. Однако при верно подобранном лечении исцеление пациентов может достигать до 90% от числа заболевших.

    Источник: http://ogepatite.ru/c/rnk-virusa-gepatita-c.html

    Маркеры гепатита С и расшифровка результатов количественного анализа HCV RNA

    В последнее время в поисковиках интернет-ресурсов все чаще появляется запрос «количественный анализ на гепатит с расшифровкой».

    Действительно, вирус гепатита распространен и опасен, заболевание поражает печень. Название его произошло от лат. hepatitis — воспаление печени. Заражение происходит через кровь либо половым путем, чаще болеют взрослые люди в возрасте от 25 до 50 лет.

    Выделяют несколько типов этого заболевания. Гепатит С не имеет яркой выраженности, но в 40–70% случаев переходит в хроническую форму, способен вызвать цирроз печени и рак. Это заболевание требует точного диагностирования и расшифровки полученных данных, для чего разработаны методики. Одна из них — РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР.

    РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР

    РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

    Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам. В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.

    Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции). В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе. Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

    Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

    Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

    РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

    • имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
    • определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
    • определяется вид возбудителя.

    Отличия количественного анализ HCV RNA от качественного

    Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

    Эти исследования имеют различные задачи.

    Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена. Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса. Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

    Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

    Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

    Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

    Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

    • прояснения окончательного диагноза;
    • выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
    • мониторинга терапии.

    Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

    • прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
    • за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
    • ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
    • за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
    • перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

    Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

    Расшифровка количественного анализа

    После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

    • HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
    • LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

    Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

    Источник: http://pechenka.online/gepatit/c/analiz-hcv-rna.html